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補體介導(dǎo)法細(xì)胞毒實驗

發(fā)布時間： 2021-11-01　　點擊次數(shù)： 1217次

材料與儀器
C57BL／6J小鼠
Hank’s液單克隆抗體補體伊紅-Y染液
眼科剪眼科鑷平皿不銹鋼網(wǎng) 試管吸量管尖吸管載玻片蓋玻片顯微鏡
實驗步驟

一、實驗方法

1. 小鼠胸腺細(xì)胞懸液的制備：將4～6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死，取出胸腺放入已加入約4 ml冷Hank’s液的平皿中，在100目的不銹鋼網(wǎng)上研磨后，過篩，放入試管，離心1 000 rpm，5分鐘，用Hank’s液洗兩次。將沉淀的細(xì)胞重懸于Hank’s液中，配成1×107/ml細(xì)胞懸液。

2. 取試管3支，標(biāo)明順序，依據(jù)下表依次加入1×107/ml胸腺細(xì)胞懸液、抗小鼠Thy-1的單克隆抗體(最適稀釋度)及Hank’s液，放入37℃水浴30分鐘。

3. 取出后每管加入1%伊紅-Y染液1滴，混勻，室溫放置2分鐘。

4. 重新混勻后分別在一張載玻片上滴片，加蓋玻片鏡檢。先在低倍鏡下觀察，再用高倍鏡觀察，比較3管中細(xì)胞死活情況。

二、實驗結(jié)果

死細(xì)胞呈紅色，無光澤且腫脹變大；活細(xì)胞不著色、有光澤且形態(tài)正常。

高倍鏡下計數(shù)200個細(xì)胞并計算其中死細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。計算公式如下：死細(xì)胞百分?jǐn)?shù)= EQ EQ \F(實驗管死細(xì)胞數(shù)%-對照管死細(xì)胞數(shù)%，100%-對照管死細(xì)胞數(shù)%)

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