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原代細胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染操作指導

發(fā)布時間： 2022-09-08　　點擊次數(shù)： 957次

　　細胞轉(zhuǎn)染是外源基因進入真核細胞的一種重要方法。這些外源DNA或RNA通過原代細胞轉(zhuǎn)染試劑的包裝輔助才能順利進入細胞，發(fā)揮相應的作用，進而研究其細胞功能及相應的影響。廣泛用于基因功能研究、調(diào)控基因表達、癌癥、疾病模型相關(guān)研究和重組蛋白研究等生物學試驗。細胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率高，細胞毒性小，適合各種核酸分子或蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)染實驗。
　　目前原代細胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染操作主要有三種方法：生物轉(zhuǎn)染，物理轉(zhuǎn)染和化學轉(zhuǎn)染。
　　生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體，以慢病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見，其侵染效率可以達到90%以上，但常因安全性等問題，很多實驗室對其敬而遠之。
　　物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因槍，無論哪一種都需要特定的設(shè)備，且性能好的設(shè)備價格也都很昂貴。
　　化學轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學研究中常用的轉(zhuǎn)染方法，主要包括陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學分子與帶有負電荷的核酸通過正負電荷作用形成穩(wěn)定的復合物。
　　一方面使復合體整體帶上正電荷（多數(shù)細胞膜表面帶有弱的負電荷，通過電荷作用吸引復合體到細胞膜表面）；
　　另一方面對線性的核酸進行濃縮，使其體積變小更易穿透細胞膜。

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